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                  江西 現(xiàn)貨大鼠脂多糖 (LPS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

                  發(fā)布時間: 2014/11/20  點擊次數(shù): 760次
                  提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大小:
                  圖片類型: 下載次數(shù): 162
                  資料類型: DOC 瀏覽次數(shù): 760
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                  大鼠ELISA試劑盒實驗原理:

                    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠脂多糖 (LPS)水平。用純化的抗-脂多糖抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入脂多糖 (LPS),再與HRP標記的羊抗鼠抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的脂多糖(LPS)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠脂多糖 (LPS)濃度。

                  大鼠ELISA試劑盒操作步驟

                  1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為120/L,80μg/L,40μg/L,20μg/L, 10μg/L)。

                  2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

                  3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

                  4.         配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

                  5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

                  6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

                  7.         溫育:操作同3。

                  8.         洗滌:操作同5。

                  9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

                  10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。

                  11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

                  大鼠ELISA試劑盒保存條件及有效期:

                  1.試劑盒保存:2-8℃。

                  2.有效期:6個月

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