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                  ELISA試劑盒一定要做預(yù)實驗嗎?

                  發(fā)布時間: 2014-04-17  點(diǎn)擊次數(shù): 3220次

                  以前覺得ELISA試劑盒的原理非常簡單,可是真正做起來才知道很多問題自己都一知半解,所以不知從何下手。
                  ELISA試劑盒實驗需要注意什么?
                  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
                  2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
                  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間4.控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
                  5.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
                  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
                  6.底物請避光保存。
                  7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
                  8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
                  9.本試劑不同批號組分不得混用。
                  10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
                  ELISA試劑盒定量測定
                  ELSIA操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數(shù)紙,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

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